
病毒滅活檢測病毒是一種可以在其它生物體間傳播并感染生物體的微小生物(其實因為病毒本身不能進行新陳代謝,所以某種程度上還不能說病毒是生物)。有時使用“病毒”描述那些在真核生物中傳播和感染的生物;使用“噬菌體”或“吞噬體”來描述那些在原核生物間傳播的生物。
病毒滅活是指用物理或化學(xué)手段殺死病毒,但是不損害它們體內(nèi)有用抗原的方法。滅活病毒,會使病容毒蛋白的結(jié)構(gòu)受到破壞,蛋白不再有生理活性,所以失去感染,致病和繁殖能力,但是常規(guī)的滅活不影響病毒蛋白的一級結(jié)構(gòu),意思就是病毒蛋白的序列沒有變化。*系統(tǒng)對抗原的識別分成兩種,一種是構(gòu)像表位,一種是線性表位。構(gòu)象表位意思就是蛋白的三維結(jié)構(gòu),而線性表位就是蛋白的序列一級結(jié)構(gòu)。T細胞只需要識別線性表位就成接受*呈遞細胞給出的信號,引發(fā)*反應(yīng)。所以滅活的病毒具有抗原性,但失去感染力。這個其實是很多疫苗的制造原理。滅活的病毒失去感染活性,但仍有融合活性。用于動物細胞工程中的細胞融合的誘導(dǎo)劑。
病毒滅活試驗病毒懸液的制備:
1、從液氮中取出凍存的試驗用宿主細胞,在37°C溫水中迅速融化,用毛細吸管移植于含有細胞維持液的細胞管內(nèi),吹吸數(shù)次,使混勻,立即離心(3000r/min, 3min) ,去上清液。再加入適當(dāng)?shù)募毎S持液,吹吸數(shù)次,使混勻,同上離心后,轉(zhuǎn)種于加有10完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。逐日觀察細胞生長情況,在細胞長滿單層時,用于消毒試驗。
2、取出低溫凍存的試驗病毒毒種,37°C水浴融化,用細胞維持液作10倍稀釋,然后接種于已經(jīng)長滿單層細胞的細胞瓶內(nèi),置37°C溫箱中,使與細胞吸附、生長。逐日觀察病變,待3/4細胞出現(xiàn)病變時,收獲病毒。
3、將含有病毒及宿主細胞的培養(yǎng)液,在冰浴條件下,用超聲波(或反復(fù)凍融)破碎宿主細胞,釋放病毒。然后,盡快離心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要為細胞碎片),上清液即為所需的病毒懸液。按每管1. 0分裝于無菌離心管(1.5)中。
4、取1支病毒懸液,按病毒滴度測定法,測定其病毒滴度。其余均冷凍保存于-80°C備用。
病毒滅活效果測試:
病毒消殺產(chǎn)品檢測在對消毒產(chǎn)品開展病毒殺滅效果檢測工作時,會根據(jù)產(chǎn)品實際情況進行病毒滅活分析,病毒滅活效果驗證。
病毒培育與滅活實驗:
1、實驗材料:
實驗用病毒株,宿主細胞,細胞培養(yǎng)瓶與 96 孔培養(yǎng)板,恒溫水 浴箱,二氧化碳培養(yǎng)箱,層流**凈工作臺,-80℃低溫箱,二氧化碳培養(yǎng)箱,液氮,離心設(shè)備,移液器,細胞維持培養(yǎng)基,細胞完全培養(yǎng)基,去離子水等。
2、實驗過程:
病毒懸液制備:實驗組,陽性對照組,陰性對照組。病毒培育需每日觀察細胞與宿主細胞生長情況,接種細胞,病變收獲病毒, 每組按照特定條件設(shè)置病毒滅殺實驗驗證,并每組進行噬斑病毒感染滴度測定。平均滅活對數(shù)值計算,評價。
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