組織固定后,要除去組織中滲入的固定液和固定液產生的沉淀、結晶、色素等物質,否則會影響以后的染色效果,該過程即為固定后處理。處理方法要根據固定液來選擇,微生物學切片,經過中性多聚甲醛固定的組織一般采用流水沖洗24小時來處理(在流水沖洗之前,可對組織塊進行適當的修整,便于包埋和切片的制作)。此外,含鈣組織,如:骨、牙齒等,在沖洗之后還應進行脫鈣處理。一般采用EDTA對含鈣組織盡行脫鈣處理,此法對組織無損傷,脫鈣速度慢,酶活性保留,對組織抗原損傷小。
包埋:包埋是指將浸蠟后的組織用包埋劑(石蠟、火棉膠、樹脂等)包被成塊的過程。組織包方法較常用的是石蠟包埋法,制成蠟塊。
切片:切片是指用切片機將石蠟組織塊根據實驗要求的厚度切成組織薄片。玻片打底是為了防止脫片,人體病理組織學切片,使組織切片牢附于玻片之上。常用的打底方法是多聚賴氨酸打底。
實驗器材和實驗試劑:
1、器材:手術器材、實驗動物、廣口瓶、固定液、標簽紙
2、固定:固定液
甲醛固定液:1份甲醛原液+9份水,貴陽切片,配成比例為4%的甲醛,即10%福爾馬林。
4%中性甲醛的配置:40%甲醛100ml,蒸餾水900ml,植物學切片,磷酸二氫鈉(NaH2PO4?H20)4g,磷酸氫二鈉(無水)13g,使pH值達7.0.
乙醇固定液:用于固定的濃度一般為80%-95%。
3、脫水:Leica脫水機、70%、80%、90%、95%、無水乙醇。
4、透明:二甲苯(苯、甲苯、氯仿、環己酮等)
5、浸蠟:Leica包埋機、軟蠟(熔點54℃以下)、硬蠟(熔點60-62℃)。
6、切片:Leica切片機,一次性刀片,多聚賴氨酸、載玻片,水浴鍋、烤箱。
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