離子交換過程可以表示如下:
? ?■一R+Y一+x一→■一R+X一+Y一
?(陰離子交換) ? ? ■一R—Y++x+→■一R—X++Y+ ?(陽離子交換)
上式中,北京鋼襯PO管道,■代表惰性載體;R代表惰性載體上的活性基團;Y代表平衡離子(可替換離子); x代表蛋白質分子。
? ?樣品進入離子交換柱之前,共價結合于惰性載體上的活性基團大部分處于溶劑化狀態,并吸附著平衡緩沖液中帶相反電荷的離子。蛋白質樣品進入離子交換柱后,鋼襯PO管道供應,由于分子表面一些基團的電荷性質與交換劑上活性基團的電荷性質相反,鋼襯PO管道直銷,因而會通過靜電引力結合于交換劑上,并把其原來吸附的平衡離子取代下來。
緩沖液pH的確定首先取決于被分離物質的等電點,采用陽離子交換劑時應低于物質的等電點,采用陰離子交換劑時應**物質的等電點。同時要結合考慮被分離物質的溶解度、穩定性和離子交換劑的活性基團的PK′。用陰離子交換劑時pH應低于其pK′,鋼襯PO管道銷售,用陽離子交換劑時pH應**其pK′,且應使緩沖液pH介于樣品等電點和pK′之間。
? ?為了降低鹽離子的競爭,起始緩沖液的濃度要盡可能的低(如0.01 mol/L左右)。這 就需要選用其pK′接近所需pH的緩沖離子,以使緩沖液具有較強的緩沖能力,避免緩沖離子與離子交換劑作用而引起pH的改變。當確信樣品易被吸附后,可適當提高起始緩沖液的濃度以**一定的緩沖能力。
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