{微生物檢測}微生物分離純化

含有一種以上的微生物培養物稱為混和培養物(mixed culture)。如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，微生物檢測報告，那么這個菌落稱為純培養(pureculture)。在進行junzhong鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養物。得到純培養的過程稱為分離純化，方法有許多種。

1、傾注平板法

首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50℃左右的營養瓊脂培養基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養。單一細胞經過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復上述步驟數次，微生物檢測機構，便可得到純培養物。

2、涂布平板法

首先把微生物懸液通過適當的稀釋，取一定量的稀釋液放在無菌的已經凝固的營養瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃guadao把稀釋液均勻地涂布在培養基表面上，經恒溫培養便可以得到單個菌落。

3、平板劃線法

zui簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環取培養物少許在平板上進行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、fangshe法、四格法等。當接種環在培養基表面上往后移動時，接種環上的菌液逐漸稀釋，最后在所劃的線上分散著單個細胞，經培養，每一個細胞長成一個菌落。

微生物計數

3.濾膜法

濾膜法是當樣品中菌數很低時，可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器。然后將濾膜干燥、染色，并經處理使膜透明，微生物檢測中心，再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積上)的細菌數。

此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數。例如測定飲用水中大腸gan菌的數目:將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養。在該培養基上大腸gan菌的菌落呈現黑色，可根據培養基上黑色菌落的數目，計算出水樣中大腸gan菌的數目。

此法也是統計樣品中活菌的數目。

4.比濁法

原理是在一定范圍內，微生物檢測，菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可借助與分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內，否則不準確。

5.顯微鏡直接計數法

在課本生物選修1生物技術實踐P22中“除了上述活菌計數法外，顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法。”這里說的顯微鏡直接計數，我認為應該是在稀釋涂布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數。再如濾膜法也一樣，可以有兩種情況。

另外，微生物計數法發展迅速，多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目。

計數方法

? ?計數方法包括平皿法、薄膜過濾法和較可能數法（Most-Probable-Number Method，簡稱MPN法）。MPN 法用于微生物計數時jing確度較差，但對于某些微生物污染量很小的供試品，MPN法可能是更適合的方法。

? ?供試品檢查時，應根據供試品理化特性和微生物限度標準等因素選擇計數方法，檢測的樣品量應能**所獲得的試驗結果能夠判斷供試品是否符合規定。所選方法的適用性須經確認。

? ?計數培養基適用性檢查和供試品計數方法適用性試驗

? ?供試品微生物計數中所使用的培養基應進行適用性檢查。

? ?供試品的微生物計數方法應進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產品的微生物計數。

? ?若檢驗程序或產品發生變化可能影響檢驗結果時，計數方法應重新進行適用性試驗。

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