微生物計數

3.濾膜法

濾膜法是當樣品中菌數很低時，可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器。然后將濾膜干燥、染色，并經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積上)的細菌數。

此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數。例如測定飲用水中大腸gan菌的數目:將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養。在該培養基上大腸gan菌的菌落呈現黑色，可根據培養基上黑色菌落的數目，計算出水樣中大腸gan菌的數目。

此法也是統計樣品中活菌的數目。

4.比濁法

原理是在一定范圍內，菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，微生物限度檢查法，光密度越大。因此可借助與分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內，否則不準確。

5.顯微鏡直接計數法

在課本生物選修1生物技術實踐P22中“除了上述活菌計數法外，顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法。”這里說的顯微鏡直接計數，我認為應該是在稀釋涂布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數。再如濾膜法也一樣，可以有兩種情況。

另外，微生物計數法發展迅速，微生物限度檢測，多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目。

微生物限度檢查

（4）需用特殊方法制備供試液的供試品

? 膜劑供試品 取供試品，剪碎，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養基，浸泡，振搖，制成1：10的供試液。若需要，調節供試液pH值至6～8。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。

? 腸溶及結腸溶制劑供試品 取供試品，加入pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液（用于腸溶制劑）或pH7.6 無菌磷酸鹽緩沖液（用于結腸溶制劑），置45℃水浴中，振搖，使溶解，制成1：10的供試液。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。

? 氣霧劑、噴霧劑供試品 取供試品，置-20℃或其他適宜溫度冷凍約1小時，取出，迅速消毒供試品開啟部位，微生物限度室，用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔，放至室溫，并輕輕轉動容器，使拋射劑緩緩全部釋出。供試品亦可采用其他適宜的方法取出。用無菌zhu射器從每一容器中吸出藥液于無菌容器中混合，然后取樣檢查。

? 貼膏劑供試品 取供試品，去掉防粘層，將粘貼面朝上放置在無菌玻璃或塑料器皿上，微生物限度，在粘貼面上覆蓋一層適宜的無菌多孔材料（如無菌紗布），避免貼膏劑粘貼在一起。將處理后的貼膏劑放入盛有適宜體積并含有表面活性劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀釋液的容器中，振蕩至少30分鐘。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。

2.薄膜過濾法

? ?除另有規定外，按計數方法適用性試驗確認的方法進行供試液制備。取相當于1g、1ml或10c㎡供試品的供試液，若供試品所含的菌數較多時，可取適宜稀釋級的供試液，照方法適用性試驗確認的方法加至適量稀釋液中，立即過濾，沖洗，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養基或沙氏葡萄糖瓊脂培養基上培養。

? ?培養和計數 培養條件和計數方法同平皿法，每張濾膜上的菌落數應不**100cfu。

? ?菌數報告規則 以相當于1g、1ml或10c㎡供試品的菌落數報告菌數；若濾膜上無菌落生長，以<1報告菌數（每張濾膜過濾1g、1ml或10c㎡供試品），或<1乘以zui低稀釋倍數的值報告菌數。

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