3、顯示堿性磷酸酶(APL)的鈣鈷法(Alkaline phosphohydrolase)
⑴酶的定位及其生物學意義:
ALP在堿性環境下能催化各種醇和酚的磷酸酯水解,參與磷酸根的跨膜轉運過程 組織切片,并有磷酸轉移的作用,故在細胞膜上運輸較活躍,如毛細血管內皮細胞 新鄉組織切片供應,腎近曲小管刷狀緣 新鄉組織切片報價,腸上皮紋狀緣等處 新鄉病理組織切片,該酶的活性較高。
⑵原理:ALP將磷酸鹽底物(如β-甘油磷酸鈉等)分解產生磷酸根離子,后者為孵育液中的氯化鈣捕獲生成磷酸鈣沉淀,但該沉淀為非金屬鹽,需加入硝酸鈷,使其生成磷酸鈷沉淀,因無色,再需通過硫化銨處理,形成棕黑色硫化鈷沉淀而被顯示。在PH9.2—9.4環境中表現較大活性。反應式如下:
ALPCa++
? ? ?β-甘油磷酸鈉磷酸離子Ca2(PO4)2
Co(NO3)2(NH4)2S
? ?CO2(PO4)2CoS↓
(無色)(棕黑色)
⑶結果:酶活性部位為棕黑色CoS沉淀。
注意事項 ? ①社團塊固定、脫水、透明和浸蠟的質量直接影響切片制備。切片過程中碰到的困難首先應注意從切片前的上述各環節中尋找原因。 ? ②切片機的質量是制備優質切片的重要前提。要使用質量好的切片機,規范地切片,精心維護切片機。 ? ③經由內窺鏡、穿刺等獲取的細小社團,應間斷性連續切片多面(一般至少制備6張蠟片,須要時制備更多張)。需作特殊染色、*組化染色等的病例,可預制蠟片備用。 ?④切片人員應細心操作,防范被切片刀具割傷。
包埋 ? (1)手工常規包埋:拜見上述的“㈠手工操作”項。 ? (2)用社團包埋機時,按有關廠商說明書的規定操作。
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