PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成,熒光定量PCR儀,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。PCR儀器溫度控制性能的影響因素:
一、PCR儀器之間的差別對實驗結果的影響。如前所述,PCR儀價格,沒有任何兩臺PCR儀器的溫度控制是一模一樣的。相對于預設的溫度模塊溫度總是偏高或偏低,就是同一模塊不同的孔之間,溫度有時也會不一樣,相差可能達幾攝氏度之多。一些PCR儀溫度控制性能的不足造成的后果是:當PCR儀的模塊溫度在升溫時,溫度過沖或不足,不能準確的達到預設的平臺溫度?! ?/p>
二、溫度控制技術的差別對實驗結果的影響。導致PCR儀溫度控制性能優劣的因素,首先是溫度控制技術。調節PCR儀模塊的溫度,使其達到并保持在某一溫度有很多方式。每一種方式都有優點和缺點。另外,這些技術被運用控制的水平對于溫度控制的水準是很重要的,基因擴增儀PCR,且有很大不同。大多數PCR儀器的溫度控制性能是很差的。在單一或多傳感器控制機制上的不同顯而易見的引起了溫度的不均一性?! ?/p>
PCR儀工作原理利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進而達到基因復制的目的。PCR的反應包括三個主要步驟分別是:
1. Denaturation 2. Annealing of primers,3. Extension of primers。 所謂 Denaturing乃是將DNA加熱(至90~95℃)變性, 將雙股的DNA加熱后轉為單股DNA以做為復制的模板. 而Annealing 則是令 Primers于一定的溫度下(冷卻至55~60℃)附著于模板DNA兩端。 最后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加熱至70~75℃)進行引物的延長 Extension of primers及另一股的合成。PCR的較早設想核酸研究已有100多年的歷史,二十世紀60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術,Korana于1971年較早提出核酸體外擴增的設想:“經過DNA變性,PCR儀,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復該過程便可克隆tRNA基因”。
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